首页 > 技术文章 > 液相色谱仪常见故障分析及解决要点
液相色谱仪常见故障分析及解决要点
2013-08-21 [1903]

液相色谱仪常见故障分析及解决要点 
  既使日常精心维护的液相色谱仪,随着使用时间的增加或使用者经验不足也会出现一些问题或故障。样品中溶剂出峰时,使用流动相作样品的  溶剂;出现进样阀残余峰时,使用强溶剂清洗进样阀,并改进阀和样品的清洗程序;流动相用水不合格率,应使用HPLC级的水。

 

  既使日常精心维护的液相色谱仪,随着使用时间的增加或使用者经验不足也会出现一些问题或故障。现将液相色谱仪容易出现的故障及解决办法介绍如下:

  1.保留时间变化

  保留时间的变化有三中情况:波动、缩短、延长。

  保留时间出现波动时,应检查柱温是否处于恒温状态,如果设置为室温,气温的变化

  会引起保留时间的波动,应该设置为恒定温度;等度和梯度间还没有充分达到平衡状态时,应该用十倍以上柱体积的流动相去平衡色谱柱;缓冲液浓度太低时,应换用>25mmol/L的缓冲液;色谱柱被污染或已经接近柱寿命时,应更换保护柱或换新色谱柱。

  保留时间缩短时,流速增加,应检查流速的设定;柱温高时,应检查柱的设置;进样量太大时,减少样品用量或降低样品浓度;流动相的组成发生了改变,比如流动相中易挥发有机相蒸发,两相之间互溶不好,会导致流动相不均匀或某一相出现部分沉淀;流动相的PH值应保持3~7.5范围内,否则会引起柱键合相的流失。

  保留时间延长时,流速减小,应检查流速的设定和管路是否有泄露;柱温低时,检查

  柱温的设置;流动相的组成发生了改变,比如流动相中易挥发有机相蒸发,两相之间互溶不好,会导致流动相不均匀或某一相出现部分沉淀;检查流动相的pH值是否3~7.5范围内,否则会引起柱键合相的流失。

  2.峰拖尾

  色谱柱超载时,要减少进样量或稀释样品或使用高溶量的色谱柱;色谱柱性能不佳时,更换色谱柱;死体积或柱外体积过大时,将连接降至zui低,并对所有连接点作合理的调整,尽可能采用细内径的连接;加入硅羟基,其作用是纯化色谱柱,增加缓冲液的浓度,降低流动相的pH值,纯化样品;出现峰干扰时,应清洁样品,调整流动相。

  3.峰展宽

  进样体积过大时,用流动相配样;样品过载时,进小浓度、小体积样品;在进样阀中

  造成峰扩展时,进样前后排出气泡,以降低扩散;流动相粘度过高时,提高柱温,并采用低粘度流动相;等度洗脱,保留时间过长时,要增加流速或改用梯度洗脱;柱外体积过大时,[1]将连接管径和连结管降至zui小。

  4.基线噪声

  流动相或检测器中有气泡时,要对流动相进行脱气处理;检测器灯有连续噪声时,更

  换氘灯;出现由污染引起的随机噪声时,应清洗色谱柱、净化样品、使用HIPLC级试剂;偶然有噪声时,可能是来自电源的干扰,如果电压不稳时,应采用稳压电源。

  5.肩峰或分叉

  进样量太大或样品浓度过高时,要减少进样量或稀释样品;样品溶剂太强时,应使用软弱的样品溶剂;色谱柱性能欠佳时,应更换色谱柱。

  6鬼峰

  色谱柱未达到平衡时,要继续平衡色谱柱;样品中溶剂出峰时,使用流动相作样品的

  溶剂;出现进样阀残余峰时,使用强溶剂清洗进样阀,并改进阀和样品的清洗程序;流动相用水不合格率,应使用HPLC级的水。

  使用注意事项

  在使用混合溶剂作流动相时,一定要先混合,再过0.45um滤膜;等流动相恢复至室温,用超声波或He气进行脱气处理后,方可使用。

  更换流动相时,必须按一定的程序进行,否则会产生问题。更换流动相有三种情况:互溶性流动相的更换、无互溶性流动相的更换和缓冲溶液的更换。对于*种情况,先用准备更换的流动相把吸滤器完全清洗干净,再打开仪器的排液阀,按清洗键,清洗泵中的流动相。

  将吸滤器放入新流动腥中,减慢流速清洗数分钟后关闭排液阀。接下来清洗色谱柱和检测器检测池直到基线平稳。对于第二种情况,先用与新旧流动相都互溶的中间清洗液(如:异丙醇)清洗,再用新流动相清洗,具体过程与*种情况相同。对于第三情况,应先用蒸馏水作为中间清洗液进行清洗,再用新流动相清洗即可。

文章类型:
关键字:色谱柱 柱温 液相色谱仪 互溶性 有机相