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如何正确对液相色谱仪进行检定?
2022-04-18 [65]
  液相色谱仪根据固定相是液体或是固体,又分为液-液色谱(LLC)及液-固色谱(LSC)。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较,具有高效、快速、灵敏等特点。
 
  液相色谱仪的检定方法:
 
  1.秒表:分度值小于0.1s。
 
  2.分析天平:zui大称量200g,zui小分度值0.1mg。
 
  3.容量瓶
 
  4.微量注射器
 
  5.标准物质和试剂
 
  6.检定方法:
 
  a.泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差SR的检定。将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好,以甲醇为液动相,按表1设定流量,待流速稳定后,在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相,同时用秒表计时,准确地收集10~25分钟,称重,按下式计算Ss和SR。Ss=(Fm—Fs)/Fs×100%SR=(Fmax—Fmin)/F×100%式中Ss为流量设定值误差(%);Fm=(W2—W1)ρt·t为流量实测值;W2:容量瓶+流动相的重量(g);W1:容量瓶的重量(g);Fs:流量设定值(ml/min);ρt:实验温度下流动相的密度(g/cm3);t:收集流动相的时间(min);SR:流量稳定性误差(%);Fmax:同一组测量中流量zui大值(ml/min);Fmin:同一组测量中流量zui小值(ml/min); F:同一组测量中的算术平均值(ml/min)。
 
  b.定性、定量测量重复性的检定 将仪器联接好,使之处于正常工作状态,用进样阀的定量管注入适当的标准溶液(萘或联苯)或稳定的待分析样品溶液,记录保留时间和峰面积,连续测量5次,按下式计算相对标准偏差RSD。
 
  c.紫外检测器性能
 
  可调波长紫外-可见光检测器波长示值误差和重复性误差的检定将检测器与记录仪联好,接通电源稳定后,先将检测波长调至235nm,用甲醇用流动相,流速1.0ml/min,用进样器注入重铬酸钾的硫酸溶液(取120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg,精密称定,用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml,摇匀,即得)20ul,待出峰时立即停泵,改用波长扫描方式,得到重铬酸钾在紫外-可见光区的吸收曲线,记录其在235nm、257nm、313nm、350nm附近波长处的zui大或zui小吸收波长,分别找出各点zui大或zui小波长与标准波长之差即为波长示值误差;重复测定3次,各点zui小与zui大值之差即为波长重复性误差。
 
  基线漂移和基线噪声的检定将仪器各部分联接好,紫外检测器波长调到254nm,流动相为100%甲醇,流速为1.0ml/min,吸收度范围选择较灵敏档,开机,待基线稳定后,记录基线30-40分钟,计算基线漂移和噪声。
 
  较小检测浓度在静态条件下,用进样器注入4×10-8g/ml萘的甲醇溶液,样品峰高应大于或等于两倍基线噪声峰高,按下式计算zui小检测浓度。 Cl=2×HN×C /H式中,Cl:zui小检测浓度(g/ml);HN:噪声峰高(记录仪器数或实测高度cm);C:样品浓度(g/ml);H:样品峰高(记录仪器数或实测高度cm)。