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液相色谱仪分析寡糖链结构成分
2014-08-15 [1330]
 1 试剂与仪器
Agilent 1100液相色谱仪;DMX 500核磁共振仪;正相 柱:Nucleosil 100 Silica 5  ,250 lnln×4.6 mm;氨基柱:Hypersil APS-1 250 mill× 4.6 mill,5 m;反相柱:Zorbax ODS 150 lnln×4.6 lnln,5, Sephadex LH-20葡聚糖凝胶;硅胶薄层板、薄层层析显色剂、DMF、甲基甘露糖、甲基葡 萄糖、甲基半乳糖、Sepharose;(+)-MNB甲酸及(4-)-MNB甲酸由本实验室方法合成;HPLC所用试剂为国产 HPLC级,其余试剂均为国产分析纯。葡聚三糖、葡聚六糖由。
 
2 实验方法
2.1 寡糖的荧光衍生化反应 取寡糖0.1 mg,按文献[8]报道方法将其还原末端还原成糖醇,减压浓缩至干。生成物溶于0.5 mL干燥的DMSO,加入0.1 mL新配制饱和NaOH水溶液,搅拌20 rain后加入0.2 mL CH I[9】反应2 h,常温减压蒸馏除去 CH3I,LH-20柱分离纯化(柱高 15 cm,内径0.8 cm,移动相为,甲醇,流速为0.5 mL/min)。产物浓缩至干,加甲苯共沸除去水分,加入AcC1 5O0  和12 moVL的HC1 50密闭试管中50~C反应 1 h。反应结束后 ,反应液经 N:吹干后,用 100  乙酸乙脂溶解,平均分成两,管,再次用N:吹干,分别加人含有2 mg(+)及(±)-MNB甲酸的DMF溶液5o  ,60~C反应0.5 h。
2.2 I-IPLC分析 将2.2.I得到的寡糖荧光衍生物用HPLC移动相稀释后,用于 HPLC分析。
2.3 寡糖 ItPLC分析标准单糖(+)-MNB甲酸衍生物的合成
 
3 结果与讨论
色谱条件的选择 为有效分离各种单糖衍生物,本研究比较了硅胶柱、氨基柱和 ODS 3种层析柱的分离效果。在 ODS柱上,各样品保留时间极为接近,分离效果不好。硅胶柱及氨基柱基本能达到分离目的,实验结果 在氨基柱上5种单糖的D一,£一手性对映体能有效分离,保留时间也相对较短;而在硅胶柱上,虽 然部分单糖样品的分离因子及分离度优于氨基柱,但是4-0.乙酰基.2,3,6.三.0.甲基葡萄糖 D.手性 异构体的甲酸衍生物不能分开,改变移动相配比,温度条件等方法也未能达到分离目的。因此,zui终选择氨基柱。