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原来这才是荧光检测器原理问题的实质!
2021-04-21 [194]
  荧光检测器是一种检测器,灵敏度在目前常用的HPLC检测器中较高,在HPLC中应用较多。仅次于紫外吸收检测器。它用于能激发荧光的化合物。
 
  荧光检测器的工作原理是:
 
  用紫外光照射某些化合物时它们可受激发而发出荧光,测定发出的荧光能量即可定量。很多与生命科学有关的物质,如氨基酸、胺类、维生素、甾族化合物及某些代谢药物都可以用荧光法检测。荧光检测器在生物样品痕量分析中很有用,尤其在用荧光衍生剂后,可以检测很微量的氨基酸和肽。
 
  荧光检测器的优势:
 
  灵敏度极高。荧光检测器的灵敏度比紫外-可见光检测器的灵敏度约高两个数量级,较小检测量可达10^(-13g)。这是因为在紫外吸收检测法中,被检测的信号A=lg(Io/I),即当样品浓度很低时,检测器所检测的是两个较大信号Io及I的微小差别;而在荧光检测法中,被检测的是叠加在很小背景上的荧光强度。荧光检测器是较灵敏的液相色谱检测器,特别适合于痕量分析。愈是常用的衡量检测器灵敏度的基准物质。另外,荧光检测器的灵敏度还可以用水的拉曼谱带的信噪比来衡量。
 
  良好的选择性。产生荧光的一个必要条件是该物质的分子具有能吸收激发光能量的吸收带,即物质分子具有一定的吸收结构;另外的条件是吸收了激发光能量之后的分子具有高的荧光效率。相对较少的分子具有大的足够检测的量子效率是荧光检测器高选择性的主要原因。在很多情况下,荧光检测器的高选择性能够避免不发荧光的成分的干扰,成为荧光检测的独特优点。图4-5-12, 中虽然紫外# 可见光检测器在265nm可以检测牛奶中的维生素B2,但却取激发波长265nm,发射波长520nm做荧光检测。因为基体成分在此条件下不存在干扰荧光,具有更准确的检测结果。